反相C18分析色譜柱的分離原理是什么?
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反相 C18 分析色譜柱的分離原理主要基于疏水作用，具體如下：
1、固定相的性質
反相 C18 色譜柱的固定相是在硅膠基質表面鍵合了十八烷基硅烷(C18)疏水基團1.硅膠本身具有多孔結構和較大的比表面積，能夠提供良好的物理吸附基礎。而鍵合的 C18 基團則賦予了固定相很強的疏水性，其碳鏈較長且呈非極性，可與樣品中的非極性或弱極性組分發生疏水相互作用。
2、流動相的作用
流動相通常是極性較強的溶劑，如甲醇、乙腈與水的混合溶液等。在分離過程中，流動相不斷地沖洗色譜柱，推動樣品在柱內移動。當樣品進入色譜柱后，流動相中的極性溶劑分子會與固定相表面的 C18 疏水基團形成一種競爭關系。對于極性較強的組分，它們更容易與流動相中的極性溶劑分子相互作用，在柱內的保留時間較短，會較快地被洗脫下來;而對于非極性或弱極性的組分，它們與固定相上的 C18 疏水基團之間的疏水作用較強，會在固定相表面有一定程度的吸附和保留，從而在柱內的移動速度較慢，保留時間較長，實現了不同極性和疏水性組分的分離。
3、樣品分子的特性影響
樣品中不同組分的疏水性差異是實現分離的關鍵。疏水性較強的分子與 C18 固定相的相互作用更顯著，在柱內的保留時間更長;而疏水性較弱的分子則更容易被流動相洗脫。此外，分子的大小、形狀以及所帶的電荷等因素也會對分離產生一定的影響。例如，較大的分子可能由于空間位阻效應，在固定相表面的吸附和擴散速度較慢;而帶有電荷的分子，其在反相色譜中的保留行為可能會受到流動相 pH 值的影響，在不同的 pH 條件下，分子的電荷狀態發生變化，進而影響其與固定相和流動相的相互作用。
發布于: 2025-01-03